LC-MS/MS检测38种抗生素浓度的分析方法
一、实验目的
LC-MS/MS检测38种抗生素浓度。
二、仪器
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设备名称 |
仪器编号 |
型号 |
|
液质联用仪 |
E-PC-064/E-PC-065 |
AB6500+/EXIONLC ADMP |
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冷冻离心机 |
E-QR-039 |
5430R |
|
漩涡振荡器 |
E-QR-040 |
VORTEX-2 GENI |
|
电子天平 |
E-QR-012 |
BT 25S |
三、标曲制备
抗生素系列标准浓度如下
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名称 |
标曲浓度 |
|
Sulfachloropyridazine |
0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20 ng/mL |
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Sulfadiazine |
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Sulfapyridine |
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|
Sulfathiazole |
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Lincomycin hydrochloride |
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Sulfamethizole |
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Roxithromycin |
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Sulfamonomethoxine |
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Sulfamethazine |
|
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Sulfamethoxazole |
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Sulfadimethoxine |
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Sulfaquinoxaline |
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Clindamycin hydrochloride |
0.06、0.15、0.3、0.6、1.5、3、6、15、30、60 ng/mL |
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Tylosin |
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Azithromycin |
|
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Erythromycin |
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Trimethoprim |
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Danofloxacin |
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Sarafloxacin |
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|
Difloxacin |
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Enrofloxacin |
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|
Fleroxacin |
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|
Ciprofloxacin |
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Sparfloxacin |
|
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Norfloxacin |
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Pefloxacin mesylate |
|
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Ofloxacin |
|
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Lomefloxacin |
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Chlortetracycline hydrochloride |
0.2、0.5、1、2、5、 |
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Tetracycline hydrochloride |
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Oxytetracycline hydrochloride |
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Doxycycline hydrochloride hemiethanolate hemihydrate |
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Carbadox |
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Rifampicin |
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Sulfacetamide |
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Chloramphenicol |
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|
Thiamphenicol |
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Florfenicol |
四、样品制备
土壤样品预处理:称取约4 g土壤样品于 50 mL 离心管中,加入20 mL乙腈-McIlvaine缓冲液的混合液,在摇床上混匀30 min,静置离心10 min(3000 rpm,4℃,离心)。收集上清液,重复提取一次合并提取液。以1000 ml纯水稀释提取液,并用4 mol/L硫酸调节pH值至3左右,加入10 μL 浓度为10 ng/mL的同位素内标(磺胺吡啶-D4、罗红霉素-D7、磺胺间二甲氧嘧啶-D4)。
样品富集:将固相萃取柱固定在固相萃取装置上,依次用10 ml甲醇和10 ml纯化水活化萃取柱,保证柱头浸润,预处理样品全部上样,用5 ml甲醇洗脱两次,收集全部洗脱液。洗脱液采用氮气缓慢吹至近干,用50%甲醇定容至0.1 mL,超声5min,涡旋10 min,离心10min(15000 rpm,4℃),取上清液进行液质检测。
五、分析方法
色谱条件
|
Total Time (min) |
Flow Rate (μL/min) |
A%-0.1%FA+2mM乙酸铵 |
B%-ACN |
|
0.00 |
400 |
95 |
5 |
|
0.50 |
88 |
12 |
|
|
5.50 |
55 |
45 |
|
|
6.00 |
55 |
45 |
|
|
6.10 |
95 |
5 |
|
|
8.00 |
|
95 |
5 |
|
运行时间 |
8 min |
||
|
柱温 |
40℃ |
||
|
进样量 |
5 μL |
||
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色谱柱 |
C18 2.7 μm 3.0*75 mm |
||
质谱条件
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参数名称 |
参数设置 |
|
离子源 |
电喷雾离子化源(ESI) |
|
扫描时间 |
8 min |
|
离子源电压 |
5500 V(正离子) |
|
离子源温度 |
550 °C |
|
气帘气(CUR) |
35 psi |
|
喷雾气(Gas 1) |
50 psi |
|
辅助加热气(Gas 2) |
50 psi |
|
碰撞气(CAD) |
MediμM |
|
检测模式 |
MRM多离子反应监测 |
离子对
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中文名称 |
英文名称 |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
阿奇霉素 |
Azithromycin-1 |
749.6 |
591.5 |
80 |
41 |
|
Azithromycin-2 |
749.6 |
573.5 |
80 |
46 |
|
|
红霉素 |
Erythromycin-1 |
734.4 |
576.4 |
60 |
29 |
|
Erythromycin-2 |
734.4 |
158.2 |
60 |
41 |
|
|
罗红霉素 |
Roxithromycin-1 |
837.5 |
679.4 |
60 |
31 |
|
Roxithromycin-2 |
837.5 |
158.2 |
60 |
41 |
|
|
林可霉素盐酸盐 |
Lincomycin hydrochloride-1 |
407.3 |
126.3 |
50 |
34 |
|
Lincomycin hydrochloride-2 |
407.3 |
359.3 |
50 |
27 |
|
|
盐酸克林霉素 |
Clindamycin hydrochloride-1 |
425.2 |
377.3 |
50 |
27 |
|
Clindamycin hydrochloride-2 |
425.2 |
126.2 |
50 |
35 |
|
|
泰乐菌素 |
Tylosin -1 |
916.6 |
772.4 |
30 |
43 |
|
Tylosin -2 |
916.6 |
173.9 |
30 |
49 |
|
|
甲氧苄氨嘧啶 |
Trimethoprim-1 |
291.2 |
230.2 |
95 |
33 |
|
Trimethoprim-2 |
291.2 |
261.2 |
95 |
35 |
|
|
磺胺甲恶唑 |
Sulfamethoxazole-1 |
254 |
156 |
25 |
23 |
|
Sulfamethoxazole-2 |
254 |
108 |
25 |
33 |
|
|
磺胺二甲基嘧啶 |
Sulfamethazine-1 |
279 |
186 |
67 |
24 |
|
磺胺间二甲氧嘧啶 |
Sulfadimethoxine-1 |
311 |
156 |
65 |
29 |
|
Sulfadimethoxine-2 |
311 |
108 |
65 |
40 |
|
|
磺胺间甲氧嘧啶 |
Sulfamonomethoxine-1 |
281 |
156 |
65 |
25 |
|
Sulfamonomethoxine-2 |
281 |
215 |
65 |
27 |
|
|
磺胺喹恶啉 |
Sulfaquinoxaline-1 |
301.1 |
156 |
45 |
24 |
|
Sulfaquinoxaline-2 |
301.1 |
108.1 |
45 |
36 |
|
|
磺胺嘧啶 |
Sulfadiazine-1 |
251.1 |
156.1 |
35 |
21 |
|
Sulfadiazine-2 |
251.1 |
108 |
35 |
34 |
|
|
磺胺吡啶 |
Sulfapyridine-1 |
250.1 |
184 |
35 |
21 |
|
Sulfapyridine-2 |
250.1 |
156 |
35 |
21 |
|
|
磺胺甲噻二唑 |
Sulfamethizole-1 |
271 |
156 |
25 |
22 |
|
Sulfamethizole-2 |
271 |
108 |
25 |
37 |
|
|
磺胺氯哒嗪 |
Sulfachloropyridazine-1 |
285 |
156 |
35 |
22 |
|
Sulfachloropyridazine-2 |
285 |
107.9 |
35 |
34 |
|
|
磺胺醋酰 |
Sulfacetamide-1 |
215 |
92 |
20 |
33 |
|
Sulfacetamide-2 |
215 |
108 |
20 |
28 |
|
|
磺胺噻唑 |
Sulfathiazole -1 |
256.2 |
156 |
25 |
22 |
|
Sulfathiazole -2 |
256.2 |
108 |
25 |
33 |
|
|
达氟沙星 |
Danofloxacin-1 |
358.1 |
340.1 |
100 |
34 |
|
Danofloxacin-2 |
358.1 |
314 |
100 |
27 |
|
|
沙拉沙星 |
Sarafloxacin-1 |
386.2 |
342.2 |
70 |
28 |
|
Sarafloxacin-2 |
386.2 |
368.2 |
70 |
32 |
|
|
双氟沙星 |
Difloxacin-1 |
400.2 |
356.2 |
80 |
29 |
|
Difloxacin-2 |
400.2 |
299 |
80 |
41 |
|
|
恩诺沙星 |
Enrofloxacin-1 |
360.2 |
316.2 |
80 |
27 |
|
Enrofloxacin-2 |
360.2 |
245.2 |
80 |
39 |
|
|
氟罗沙星 |
Fleroxacin-1 |
370.2 |
326.2 |
65 |
28 |
|
Fleroxacin-2 |
370.2 |
269.1 |
65 |
38 |
|
|
环丙沙星 |
Ciprofloxacin-1 |
332.1 |
314.1 |
62 |
30 |
|
Ciprofloxacin-2 |
332.1 |
288.2 |
62 |
28 |
|
|
司帕沙星 |
Sparfloxacin-1 |
393.1 |
349 |
100 |
30 |
|
Sparfloxacin-2 |
393.1 |
292.1 |
100 |
37 |
|
|
诺氟沙星 |
Norfloxacin-1 |
320.2 |
276.2 |
70 |
26 |
|
Norfloxacin-2 |
320.2 |
233.1 |
70 |
36 |
|
|
甲磺酸培氟沙星 |
Pefloxacin mesylate-1 |
334.1 |
316.1 |
70 |
33 |
|
Pefloxacin mesylate-2 |
334.1 |
290.1 |
70 |
26 |
|
|
氧氟沙星 |
Ofloxacin-1 |
362.1 |
318 |
80 |
29 |
|
Ofloxacin-2 |
362.1 |
261.1 |
80 |
38 |
|
|
洛美沙星 |
Lomefloxacin-1 |
352.1 |
265 |
75 |
34 |
|
Lomefloxacin-2 |
352.1 |
308.1 |
75 |
25 |
|
|
盐酸金霉素 |
Chlortetracycline hydrochloride-1 |
479.1 |
444.1 |
60 |
31 |
|
Chlortetracycline hydrochloride-2 |
479.1 |
462.2 |
60 |
25 |
|
|
盐酸四环素 |
Tetracycline hydrochloride-1 |
445.1 |
410.1 |
45 |
29 |
|
Tetracycline hydrochloride-2 |
445.1 |
428.1 |
45 |
25 |
|
|
盐酸土霉素 |
Oxytetracycline hydrochloride-1 |
461.1 |
426 |
52 |
29 |
|
Oxytetracycline hydrochloride-2 |
461.1 |
443.1 |
52 |
19 |
|
|
强力霉素单盐酸半乙醇半水合物 |
Doxycycline hydrochloride hemiethanolate hemihydrate-1 |
445.2 |
428.1 |
50 |
26 |
|
Doxycycline hydrochloride hemiethanolate hemihydrate-2 |
445.2 |
410 |
50 |
30 |
|
|
利福平 |
Rifampicin-1 |
823.4 |
791.6 |
70 |
26 |
|
Rifampicin-2 |
823.4 |
399.1 |
70 |
37 |
|
|
卡巴多 |
Carbadox-1 |
263.1 |
231.1 |
80 |
20 |
|
Carbadox-2 |
263.1 |
130.4 |
80 |
29 |
|
|
氯霉素 |
Chloramphenicol-1 |
323.1 |
275 |
30 |
21 |
|
甲砜霉素 |
Thiamphenicol-1 |
356.2 |
338.2 |
100 |
14 |
|
Thiamphenicol-2 |
356.2 |
307.9 |
53 |
23 |
|
|
氟苯尼考 |
Florfenicol-1 |
358.2 |
340 |
70 |
13 |
|
Florfenicol-2 |
358.2 |
310 |
60 |
23 |
|
|
磺胺吡啶-D4 |
Sulfapyridine-D4-1 |
254.1 |
160.2 |
35 |
24 |
|
Sulfapyridine-D4-2 |
254.1 |
188.1 |
35 |
25 |
|
|
罗红霉素-D7 |
Roxithromycin-D7-1 |
844.6 |
686.3 |
60 |
32 |
|
Roxithromycin-D7-2 |
844.6 |
158.2 |
60 |
44 |
|
|
磺胺间二甲氧嘧啶-D4 |
Sulfadimethoxypyrimidine-D4-1 |
315.2 |
218.1 |
100 |
28 |
|
Sulfadimethoxypyrimidine-D4-1 |
315.2 |
156.1 |
100 |
36 |
| 服务项目 | 项目细分 | 参考标准 | 方法 | |||
| 抗生素测试 | 一 | 大环内脂类 | 红霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | |
| 罗红霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 洁霉素(林可霉素) | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 阿奇霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 泰勒霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 克林霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺类 | 磺胺甲噻二唑 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | |||
| 磺胺吡啶 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺醋酸酰胺 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺氯达嗪钠 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺嘧啶 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺间甲氧嘧啶 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺甲恶唑 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺间二甲氧嘧啶 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺二甲基嘧啶 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 甲氧苄啶 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺噻唑 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 磺胺喹噁啉 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 喹诺酮类 | 氧氟沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | |||
| 诺氟沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 环丙沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 恩诺沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 洛美沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 氟罗沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 双氟沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 沙氧沙星(沙拉沙星) | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 四环素类 | 盐酸强力霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | |||
| 四环素(盐酸盐) | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 氧四环素(土霉素) | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 氯四环素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 氯霉素 | 氯霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | |||
| 氟苯尼考 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 甲砜霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 利福平 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 二 | β酰胺类 | 青霉素G | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||
| 阿莫西林 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 氨苄西林 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 氯唑西林 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 苯唑西林 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 双氯西林 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 头孢呋辛 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 头孢喹跨 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 头孢洛宁 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 头孢唑林 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 头孢哌酮 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 头孢匹林钠 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 三 | 其他 | 甲稀土霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||
| 达诺沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 马波沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 培氟沙星 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 卡巴多 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 竹桃霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 北里霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 盐霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 甲基盐霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 莫能菌素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 奥美普林 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 新生霉素 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||
| 杆菌肽 | 实验室SOP | HPLC/LC-MS | ||||








